步驟:(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、,逐滴加入二--- (dmso)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動(dòng)試管,制成細(xì)胞凍存懸液(dmsozui后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示完全之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
程序降溫儀俗稱:胚胎冷凍儀是一款新型研制成功的智能型冷凍儀。該儀器采用微機(jī)控制技術(shù),軟件,能較準(zhǔn)確地控制液氮的施放量,從而---被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。該儀器具有操作簡(jiǎn)便、人機(jī)界面清楚。程序降溫儀的原理:此款設(shè)備準(zhǔn)確地測(cè)定生物樣品的相變點(diǎn), 用微機(jī)編制降溫程序,以便在樣品相變時(shí)加大液氮輸入量,克服相變樣品溫度的回升,使細(xì)胞安全而迅速地度過(guò)相變期,這是提高被凍樣品成活率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
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